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SOD 의 중국어 이름은 초산화물 타화효소, 영어 이름은 초산화물 타화효소입니다. 분자량 (소 적혈구) 은 약 32000 으로 생물의 체내에 광범위하게 존재하는 금속단백효소이다. 그 별명은 오고틴, 오메트ein, 오토세이다. 입방체로 측정 된 아연 superoxide dismutase; Palosein 등 SOD 는 과학자들이 2 1 세기의 가장 유망한 약용 효소로 칭송받고 있다.
1. 이 과정은 적혈구, 간 및 기타 포유류 조직에서 분리되는 금속 효소입니다. 여기에는 각각 구리 원자 하나와 아연 원자 하나를 포함하는 두 개의 하위 단위가 포함되어 있습니다. 초산화물 타화효소는 산소를 H2O 와 산소로 만들 수 있다. 그것의 성질은 효소 단백질뿐만 아니라 활성 부위의 금속 이온에도 달려 있다. 금속 이온의 종류에 따라 세 가지 종류로 나눌 수 있습니다: Cu. 아연 초산화물 타화효소와 철초산화물 타화효소, 초산화물 타화효소. 일반적으로 SOD 는 비교적 안정적입니다. 입방체로 측정한 다른 출처의 아연. 자외선 흡수 스펙트럼은 약간 다릅니다. 예를 들어 소혈 SOD 는 258nm 에서 최대 흡수를 표시하고 돼지혈 SOD 는 265nm 에서 최대 흡수봉을 표시합니다. 일정한 조건 하에서 효소의 활성화는 감소하거나 심지어 완전히 상실될 수 있다. 예를 들어 시안화물은 SOD 활성을 억제하고 과산화수소는 SOD 활성을 감소시키며 염화불화탄소는 SOD 활성을 현저히 억제한다.
둘째, SOD 의 사용은 주로 SOD 가 초산소 음이온의 제거제이며, 초산소 음이온 (O2~) 은 인체 내 유독물질로 다양한 질병을 일으킬 수 있어 염증 과정에서 발생하는 초산소 이온을 제거하여 강한 항염작용을 나타낼 수 있다.
제약 산업에서 SOD 는 초산소 이온으로 인한 당뇨병, 백내장, 류머티즘 관절염 등 다양한 질병을 치료할 수 있다. 효과적인 소염제이며 노화 방지, 항종양, 방사선, 자가 면역성 질병도 있습니다. 현대연구에 따르면 SOD 는 고혈압, 관심병, 담낭염, 폐기종 등 난치성 질병도 치료할 수 있다. 일화업: SOD 는 세포 노화와 해독을 방지하는 역할을 하기 때문에 화장품, 스킨케어 등 공업제품에 SOD 를 첨가하면 자외선 차단, 기미 제거, 피부 연화 등의 역할을 한다. 현재 화장품 업계에 없어서는 안 될 첨가제로 국내외에서 이미 대량의 제품이 출현하고 있다. 식품산업: 식품첨가물에 SOD 를 넣으면 영양을 강화하고 독성을 완화하며 체내 세포의 수명을 연장할 수 있다. 국내에는 이미 SOD 영양액 제품이 있으며 상하이 과학연구기관 관련 전문가의 검진을 통과했다.
셋째, SOD 의 발전 전망: 현재 국내에는 소수의 과학 연구 기관과 생화학 제약 공장만이 이 제품을 개발하고 있지만, SOD 제품을 사용하는 업체는 갈수록 많아지고 있어 시장 수요를 충족시킬 수 없다. 국가는 새로운 잔디 제품을 장려하고 적극적으로 개발하기 위해 핵심 기술 개발 프로젝트에 포함시키고, 많은 자금을 투입하고, 성공을 거두며, 기업 생산으로 이전하기 시작하며 시장 전망이 매우 넓다.
주의사항: (1) 우리 센터는 각계의 친구들의 현장 학습을 열렬히 환영하며, 생화학 엔지니어가 직접 가르쳐 주므로 현장 조작, 지도, 훈련을 통해 이 기술을 빨리 습득할 수 있습니다. (2) 본 회사의 동의 없이는 본 공예 및 기술 자료를 어떤 기관이나 개인에게 양도, 복제 또는 판매할 수 없으며 위반자는 법에 따라 책임을 추궁할 수 없습니다.
새로운 정제 기술
1. 주요 장비: (1) 산업용 원심 분리기 1 대; (2) 항온수욕냄비 (10L-50L) (제조) 1 세트 (3) 1 냉장고; (4) 1 개 믹서; (5) 유리그릇: 1000ml, 500ml 비이커, 50ml 비이커 2 개, 50ml 과 500ml 양컵, 각각1; (6) 몇 개의 플라스틱 통.
주요 시약: (공업순도) 레몬산 나트륨, 구연산, 포도당, 에탄올 90%, 염소 모조, 아세톤, 염화나트륨, 인산수소 나트륨, 인산이수소 나트륨, 탈 이온수 또는 증류수, 포도당 젤 세페덱스 G-/KLOC-0
셋째, 시약 준비:
1. 항응고제 공식: (1) 구연산 나트륨 30g, 구연산 25g 10g 포도당에 1l 에 물을 넣는다. 보통 7 밀리리터마다 혈액 1 밀리리터 (항응고제) 를 넣는다. (2)40g/ l 구연산 나트륨 용액:1L.
2. 생리염수: (0.9%) 9 1 그램에 0.9 그램의 염화나트륨을 넣는다.
3. 인산염 완충액의 제조: PH7.6 의 0.2M 인산염 완충액은 일반적으로 Na2HPO4 와 혼합된다. H2O, 35.6 1g/L, nah2 po4 2h2o31.21g/l, 87.0ml,
4. 냉각수: 이 과정에서-15 도의 저온을 사용합니다. 일반적으로 소금 33 그램에 100 그램의 눈이나 깨진 얼음, 혼합물은 -2 1.3 도에 달할 수 있습니다.
넷째, 공정 과정
(a) 헤모글로빈을 제외하고
1. 혈액 항응고제: 소, 말, 돼지의 신선한 혈액에 ACD 1 항응고제를 빠르게 넣고 천천히 섞어서 7 밀리리터당 1 밀리리터 또는 2 번 항응고제를 넣는다.
2. 항응고제 혈액을 원심분리기에 넣고 3000r/min 원심약 15-20 분 동안 빨대로 청액 (노란혈청) 을 조심스럽게 빨아들인 후 버린다. 2-3 배의 생리염수로 하층 적혈구를 2-3 회, 세탁할 때마다 3000r/min 으로 7-3 회 원심합니다.
3. 씻은 적혈구에 등체적인 탈 이온수를 넣고 30 분간 격렬하게 휘저어서 적혈구의 세포벽을 잘게 썰어 그 중 SOD 가 스며들게 한다. 0 ~ 4 도에서 밤을 지새우고 용혈을 유기적으로 추출하는 것이 가장 좋다.
4. 그런 다음 용혈물에 0.2-0.25 배 예냉 (-15 도) 의 95% 에탄올과 0. 1-0. 15 배 예냉을 천천히 넣는다 그런 다음 약 65438 0-5 분 동안 필터를 2500 회전/분 속도로 원심시키고 침전물을 버리기 위해 청액을 남겨 둡니다. 이때 상청액이 약간 노랑색을 띠면 빠른 여과지로 여과하여 투명하고 색깔이 파랗게 된 굵은 효소액을 얻을 수 있다.
(2) 조 효소 용액의 예비 정제:
1. 아세톤 알코올 추출: 효소액에 0.8 배 예냉 (-65438 05 C) 의 아세톤을 넣어 대량의 흰색 침전을 생성하고, 3000r/min 원심 2 분, 침전을 수집하고, 상청액은 흡수를 거치지 않고 바로 쏟아낸다.
2. 열변성: (단백질 제거) 항온욕조를 준비합니다. 이 과정에서 30 분 전에 물을 가득 채우고 전원을 켜고 55-60 도까지 가열하여 시간을 절약한다. 약 50 배 침전량의 0.2MPH=7.6 인 인산나트륨 완충액을 넣고 수조를 60 도로 가열하고 65,438+05 분 후에 실온으로 빠르게 식힌다. 30000.000000000005
3. 예비 순화 SOD: 상기 침전물에 탈 이온수를 넣어 농도가 20-30% 인 SOD 용액을 만들어 샘플병에 담아 냉동건조기에 넣고 전원을 켠 후 진공도는 0.2-0. 1 케어, 약/KLOC 입니다 이 제품의 비율은 3000 U/ 보다 큽니다.
(잔디 추가 정제:
잔디 제품은 일반적으로 칼럼 크로마토 그래피로 처리됩니다. 기둥층을 거쳐 SOD 는 소분자 등 불순물이 없고, 층분석 후 활성성이 높은 SOD 대분자이다. SOD 제품은 높은 가격으로 주로 생화학 시약 및 실험실 표준 시약 역할을 합니다. 현재 SOD 기둥 층분석에는 두 가지가 있는데, 단독으로 사용하거나 조합하여 사용할 수 있습니다. 일반적으로 DEAE-섬유소 층 분석 및 sephadecxg- 100 sephadex 젤층 분석, (2) 열 변성 SOD 아세톤 침전을 PH7.6 및 0.2MNaH2PO4-NaHPO4 의 버퍼액에 용해시켜 불용성 불순물이 있을 때 상청액을 DEAE-섬유소 또는 sephadsxg- 100 층 분석 기둥 (1×20cm 또는 PH7.6×30cm
동사 (verb 의 약어) 고려 사항:
1. 적절한 온도와 시간 파악: SOD 는 열에 안정적이지만 분리 순화 과정에서 낮은 온도 (보통 0- 10 도, 시간은 3 일을 넘지 않는 것이 좋다.
2. 추출순화방법에주의를 기울이십시오: 유기용제나 가열을 사용하면 단백질을 효과적으로 침전시킬 수 있지만, 적절한 용제와 가열의 조합을 파악해야 최상의 결과를 얻을 수 있습니다.
Superoxide dismutase 검출 방법: 활성 시험. 프탈페놀 자체 산화법을 사용하는 것이 편리하다. 먼저 프탈페놀의 자기산화율을 측정한 다음 SOD 를 넣어 SOD 를 넣은 후의 산화율을 측정한다. 효소 활성 단위의 정의에 따르면, 최적 조건 하에서 분당 프탈페놀 자산화 분해율의 50% 를 억제하는 효소의 양은 효소 단위로 정의된다. 총 활성 값을 순차적으로 계산하거나 폴리아크릴 젤 전기 영동에 의해 순도를 결정할 수 있습니다.
초산화물 타화효소는 중요한 산소자유기 제거제이다. 약용 효소로서 국내외 생화학계와 의학계의 큰 관심을 불러일으켰다. SOD 는 류머티즘성 관절염, 심근경색 등 다양한 질병을 치료할 수 있다. , 방사선, 노화 방지, 항종양에 적극적인 역할을 하며 화장품과 식품첨가물에 널리 쓰인다.
1969 년 Mccord 와 Fridovich 가 소혈구에서 초산화물 타화효소를 처음 발견한 이후 지금까지 우리나라는 수십 개의 과학연구기관이 SOD 에 대해 대량의 연구와 시험 작업을 해왔고, 그 중 일부는 이미 양산되었다. SOD 는 국내 생화학 공동체의 관심을 끌었습니다. 1988 년 제 1 회 전국 SOD 학술회의가 저장닝보에서 열렸다. 65438 년 4 월부터 0989 년 4 월까지 하남에서 개봉하여 잔디가 중점 발전 프로젝트로 등재되었다. 90 년 7 월 대련에서 열린 제 2 회 전국 SOD 학술회의에서 SOD 는 약용 효소로 급속히 발전하여 유망한 생화학 제품이 될 것이다.
SOD 는 동물, 식물, 미생물에 광범위하게 존재하는 바이오효소이다. 외국 약용 SOD 는 혈액에서 추출한 것으로, 우리나라는 이미 20 여 종의 SOD 를 개발하여 우리나라 SOD 의 연구와 응용이 새로운 시대로 접어들었다는 것을 증명했다.
우리나라에서는 소, 말, 돼지, 닭, 개 등 동물의 혈액에서 추출한 SOD 출처가 풍부하고, 비용이 저렴하며, 추출순화가 편리하고 세포막이 깨지기 쉽다. 일반적인 분리와 순화 방법을 통해 고순도 SOD 를 얻을 수 있다.
이 프로세스는 열 변성 및 한외 여과 신기술을 사용하여 프로세스를 크게 단순화 할뿐만 아니라 이전 프로세스에 비해 제품 품질 및 수율이 크게 향상되었으며 추출 된 SOD 는 CuZu-SOD 입니다.
첫째, 약과 도구:
(1) 구연산 삼나트륨: Na3C6H6O7 (2) 산업용 아세톤 CaH6O
(3) 카테콜의 칼륨 인산염 (4) K3Poe4
(5) 약 알칼리성 음이온 교환기 DEAE Sephadsxa-50 의 외관은 40- 120ubrd 또는 DEAE-cell-ujose(DE-32) 디 에틸 셀룰로오스입니다. (6) 동결 건조기 (자체 조립)
(7) 접이식 기둥 (7.5 * 30cm) (8) 원심 분리기
이상의 시약 및 기타 약품, 기기는 각 성시 화학 시약 상점, 의료기기 상점에서 구입할 수 있습니다.
2. 구리와 초산화물 타화효소의 추출과 순수화 (우혈과 마혈을 예로 들자면)
1, 산업 공정:
항응고제로 소금을 씻다
신선한 소 피-> 적혈구-> 헤모글로빈
원심분리기는 노란 혈장을 제거하고 NaCL 을 넣는다
열 변성 1 열 변성 2
적혈구 압적-> 연한 노란색 혼합 액체-> 적혈구 압적;
68 도 30 분 60 ~ 65 도 20 분
아세톤과 아세톤 크로마토 그래피
연한 파란색 청액-> 솜 침전-> 침전-> 침전 >;
동결 건조
투석탈염
용출-> 투석액-> 투석액; 냉동 건조 제품
2. 추출법
(1) 적혈구 수집: 신선한 소 피 100 리터, 3 추가. 구연산 나트륨 8% 항응고제, 골고루 섞어주세요. 적혈구가 자연적으로 가라앉게 하고, 대부분의 상층혈장을 제거하고, 원심하층 액체는 나머지 혈장을 제거하고, 염화나트륨 3 배 0.9% (정제염) 를 넣어 두 번 세탁하고, 원심수집적혈압적 (40 리터) 을 합니다.
(2) 열변성 1: 수집한 적혈구에 염화나트륨 4 킬로그램, 염화구리 40 그램, 증류수 100 리터를 넣고 잘 섞고 수조를 68 도 30 분으로 가열하고 실온으로 빠르게 냉각시켜 침전물을 여과하고 필터를 수집한다
(3) 열 변성 2: 65 도 항온수욕에서 40g 염화구리를 필터에 천천히 첨가하여 필터가 맑고 연한 파란색이 되어 20 분 동안 보온되고, 필터가 실온으로 빠르게 냉각되어 원심상청액을 취한다.
(4)SOD 굵게: 총 부피가 0.75 배에 달하는 아세톤을 넣어 상청액을 한외 여과하고, 원심으로부터 침전물을 수집하고, 원심적으로 불용물을 제거하고, 맑은 용액을 얻고, 맑은 용액에 0.75 배 부피의 아세톤을 넣고, 원심적으로 침전을 수집하고, 무수아세톤으로 두 번 탈수하고, 진공건조를 하고, 연한 파란색 분말형 SOD 굵은품을 얻는다
(5)SOD 조품의 순수화: SOD 조품을 PH 값이 7.6 인 인산 칼륨 완충액에 2.5mmol/L 로 녹이고, 혼합액은 7.5*30cm 와 같은 층기둥이고, 이온 교환제는 DEAE-SphadexA-50 (이 기둥은 미리 완충액으로 균형을 잡는다. 일부 수집기로 수집, 용리액 투석 탈염은 농축 투석액을 얻고, 냉동건조는 SOD 완제품 (연녹색) 을 얻는다.
셋째, superoxide dismutase 활성 측정:
SOD 를 측정하는 방법은 화학법, 면역 등 전점 집중법 등 여러 가지가 있다. 화학법의 원리는 프탈페놀과 같은 일부 화합물이 자기산화 과정에서 유색 중간체를 만들어 초산소 자유기 (O2) 를 복원한다는 것이므로 SOD 를 예로 들 수 있다. 중간체의 축적을 방지하여 효소 활성을 결정하다.
1, 시약 및 도구
(1) 프탈페놀은 분석순으로 10mmol/LECL 로 50MMMMOL/L 용액을 만든다.
(2) UV-754 자외선 분광 광도계.
2. 측정 방법:
(1) 프탈페놀 자산화율 측정.
25 도, 45ml'50m mol/L, PH 8.3, K2HPO4-KH2PO4 의 완충액에 10mmol/L 벤조페놀을 넣고 빠르게 흔들어서 광학 지름/kll 을 붓는다
(2) 2) 잔디 또는 조 효소 추출물의 활성 측정:
측정 방법 및 카테콜자산화법. 프탈페놀을 첨가하기 전에, 먼저 테스트할 SOD 샘플 용액을 넣고, 다음과 같이 효소를 계산한다.
0.0700-325mm/분
-100% 도.
0.70
샘플 희석 배수
효소 활성 (U/M 1) =-반응 용액의 총 부피.
샘플의 50% 는
3, 단백질 농도 (밀리그램/밀리리터) 및 단백질 계산:
SOD 또는 조효소 추출액, 280mm 자외선 비색측정 결과, 소를 순란 표준곡선이라고 부르며 밀리리터당 ug 단백질의 양을 계산한다.
단백질 농도 = ug 단백질 /ml * 샘플 용액 희석 배수 * 10 빼기 입방체 = mg 단백질 /ml 총 단백질 = mg 단백질 /ml * 비축액 총 부피 = mg 단백질.
4. 특정 활성 계산 (단백질/mg 단위):
단위 활동당 총 활성 (단위/밀리리터)
비 활성 =-= u/mg 단백질.
단백질 농도 (밀리그램 단백질/밀리리터) 총 단백질
넷. 구리 및 아연 superoxide dismutase 의 특성;
1, Cu 및 Zn-SOD 는 청록색이고 분자량은 약 3200 이며 Cu 1 개와 Zn 1 개로 구성됩니다.
2. 열안정에 대해 천연우혈 SOD 가 75 도에서 몇 분 동안 가열되어 효소 활성 손실이 적다.
Superoxide dismutase 에 대한 3.PH 의 영향 PH 가 5.3 ~ 10.5 범위 내에 있을 때 SOD 의 촉매 속도는 영향을 받지 않습니다. PH 가 3.6 일 때, 95% 의 SODZn 이 떨어지고, PH 12SOD 의 구상이 복원되지 않아 효소 활성이 상실된다.
4.SOD 의 자외선 흡수 특성: SOD 는 280 mm 에서 흡수 피크가 없습니다.
금속은 효소 활성에 도움이됩니다. SOD 금속효소 Zn 은 분자 구조와만 관련이 있고, Cu 는 촉매 활성과 관련이 있다.
6.SOD 는 활성화 및 비활성화 기능을 가지고 있습니다.
다섯째, 의약품 및 장비:
레몬 나트륨, 분석 순수: 장쑤 화교 공 bei4 공장;
산업용 아세톤: 상하이 용제 공장;
카테 콜, 분석 순수: 구이 저우 순이 화학 공장;
여섯째, 잔디 인수 단위:
(1) 허난성 정주시 정저우 남양로 14 호 우편번호: 450053 하남 기술보 91101
(2) 쓰촨 김당현 공예기술학교 생화학과 접수실: 김당코준 정부청사 1 건물, 우편번호: 6 10404 연락처: 덩용리붕 쓰촨 농촌보 9 1 3
(3) 광동성 심천시 상보구 과학기술학원 14 번 우편번호: 5 1803 1 연락처: 황추림기술보 1992 년
참고: 1, 자료에 첨부된 제품 판매 주소 정보는 최근 2 년 동안 신문에서 발췌한 각 단위 광고이며 출처를 명시합니다.
2. 먼저 자료를 읽은 후, 자신의 실제 상황에 따라 소량의 실험을 하고, 제품의 구매부서에 미리 연락한 후, 경험을 얻은 후 대량 생산을 할 수 있습니다.
3. 구매부서에 연락할 때 독자는 반드시 미리 연락해서 우송료를 첨부해야 한다. 명확한 답을 얻은 후, 그들은 상황에 따라 그 사람을 찾을 것이다. 불필요한 경제적 부담을 피하기 위해 서두르지 마라.
4. 원료와 기구는 각지의 원료점에서 공급한다. 예를 들면 광저우의 인민남로, 상구로 등이다.
액세서리: 자세한 잔디 수집 정보
광시 난닝 생화학 제약 공장 1
주소: 루반로 1 번호
상하이 생화학 제약 공장
주소: 해주로 5 13 호
장쑤 쉬 저우 생화학 제약 공장
주소: 하이페로 86 호
4. Yanzhou 시, 산둥 생화학 제약 공장
주소: 육류 공장 내
호남 Changde 생화학 제약 공장
주소: 육류 공장 내
불산 생화학 제약 공장
주소: 불산
광저우 스타 제약 공장
주소: 광저우 허난 도로 예 공 애비뉴 북쪽 48 일
광저우 백운제약공장
주소: 광저우 월수공원은 2/KLOC-0 버스를 타고 삼원리북전에서 내려서 광천산장을 따라 200 미터를 걸어요.
하얼빈 생화학 제약 공장 하얼빈 육류 공장
주소: 하얼빈로 외남집가 12 호 전화: 제약 공장에 88423
10, 심양 생화학 제약 공장
주소: 하얼빈 황구 명련로 2 호;
장쑤 난징 생물제약공장 1 1
주소: 장쑤 난징 xiaguan 지구 baotaoqiao 근처;
12, 절강 진화 생화학 제약 공장
주소: 저장성 김화시 강변교로 5 1 호입니다.
13, 광동 바이오 제약 공장
주소: 광저우 삼원리
광동성 산 터우 생화학 제약 공장 14
주소: 호산로 서골목 2 호, 3 호; 전화: 666 124
장쑤 난징 생물제약공장 1 1
주소: 장쑤 난징 xiaguan 지구 baotaoqiao 근처
12, 절강 진화 생화학 제약 공장
주소: 저장성 김화시 강변교로 5 1 호입니다.
13, 광동 바이오 제약 공장
주소: 광저우 삼원리
광동성 산 터우 생화학 제약 공장 14
주소: 호산로 서골목 3 호, 15. 상하이 feixia 일일 화학 공장.
16. 베이징 리원 일용 화학공장
17. 난징 화장품 공장
18. 상하이 2 일용 화학공장
19 광저우 미용 화장품 공장
20 난징 제 2 의약화학제약공장
상하이 yongfang 일일 화학 공장
광저우 화장품 공장
항주 단풍계 화장품 공장
상해일용 화학품 4 공장.
천진낙진제약공장
항주 최초의 생화학 제약 공장
상하이 제약 연구소 실험 제약 공장
천진 난카이 지구 미용 화장품 공장
소주시 하우현 생화학 공장
상하이 생화학 제약 공장
천진 생물 의학 기술 개발 센터
상하이 Xianghai 미용 용품 공장
베이징 일용 화학품 4 공장.
우한 신안도제약총공장
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참고: 각 주요 제약 공장, 화장품 공장, 미용실은 모두 판매 대상이다.
연락처 전화: 0 10-68 150495, 682 12 139.
팩스: 010-68212015
주소: 베이징시 석경산구 오가촌 화전그룹 빌딩 3 층
통신: 베이징시 석경산구 40-02 1 우편함
우편 번호: 100040