SDS-PAGE 의 단백질 marker (단백질 분자량 표준 또는 계단이라고도 함) 를 기준으로 스트립에 있는 단백질의 농도를 추정하는 것은 일반적으로 밴드의 색상 농도 (단백질 농도를 나타냄) 를 비교하여 수행됩니다. 그러나 이것은 대략적인 추정치만 제공할 수 있다. 일반적인 단계는 다음과 같습니다.
1. SDS-PAGE 실행:
알려진 농도의 단백질 marker 를 사용하여 샘플과 함께 SDS-page 를 실행합니다.
2. 염색:
는 일반적으로 Coomassie Brilliant Blue 또는 은염색과 같은 염료로 접착제를 염색한 다음 색상을 제거하여 단백질 스트립을 표시합니다.
3. 명암 비교:
접착제의 스트립을 관찰합니다. 마크에 비해 샘플의 단백질 밴드 색상이 어두울수록 단백질 농도가 높아진다.
4. 농도 추정:
마크에 있는 각 스트립의 단백질 농도를 알고 있다면 샘플 밴드와 가장 가까운 마크커 밴드의 색상 농도를 비교하여 샘플의 단백질 농도를 추정할 수 있습니다. 예를 들어, marker 밴드의 농도가 50 μg 이고 색상 농도가 샘플 밴드와 비슷하다면 샘플 밴드의 단백질 농도도 약 50 μg 라고 추정할 수 있습니다.
5. 정량화 소프트웨어:
일부 연구자들은 젤 이미징 시스템과 정량화 소프트웨어를 사용하여 스트라이프 농도를 보다 정확하게 추정합니다. 소프트웨어는 밴드의 색상 음영을 분석하여 단백질의 풍도를 정량화하고 알려진 농도의 마크와 비교할 수 있습니다.
이 방법은 단백질 농도에 대한 대략적인 추정만 제공한다는 점에 유의해야 한다. 단백질 농도를 정확하게 측정하려면 Bradford 단백질 측정, Lowry 단백질 측정 또는 BCA 단백질 결정과 같은 다른 방법을 사용해야 할 수 있습니다.