ddPCR(dropletdigital PCR): 전통적인 PCR 증폭 이전에 샘플을 액적(droplet)으로 처리합니다. 즉, 핵산 분자가 포함된 반응 시스템이 수천 나노리터 수준의 액적(포함)으로 나누어집니다(각 액적에는 0, 1개 이상의 표적 분자를 검출합니다). PCR 증폭 후 각 액적은 하나씩 검출됩니다. 형광 신호가 있는 액적은 1로 해석되고, 형광 신호가 없는 액적은 0으로 해석됩니다. 포아송 분포 원리와 양성 액적의 수와 비율에 따라 시작 카피 수는 다음과 같습니다. 또는 표적 분자의 농도를 얻을 수 있습니다.
현재 두 가지 주류 구현 형식이 있습니다.
이렇게 긴 텍스트 소개를 이해하기는 정말 어렵죠? 이 기술 원리를 이해하려면 애니메이션 링크가 다음과 같이 신중하게 선택됩니다. /video/BV1Bt4y1X79e?p=1amp; share_plat=iosamp; share_tag=s_iamp; timestamp=1610781003amp; Unique_k=8JyMfj
다음 설명에서는 Bio-Rad Company의 기기 및 방법을 예로 사용합니다.
먼저 각 시료별로 반응액 20ul를 준비합니다.
반응액을 특수 플라스틱 슬라이드(카트리지)에 넣습니다.
이 슬라이드에는 3줄의 구멍이 있으며 각 줄에는 8개의 구멍이 있습니다.
3줄의 구멍:
첫 번째와 두 번째 줄의 구멍입니다. 둘 다 하단의 조립식 미세기공 파이프라인을 세 번째 구멍의 구멍에 연결한 후(한 번에 8개의 반응 용액을 넣을 수 있음) 슬라이드를 기기에 넣으면 기기가 아래의 특수 미세기공으로 오일과 물을 짜냅니다. 동시에 파이프라인에서 짜내면 유중수 에멀젼이 형성되어 세 번째 줄의 구멍으로 들어갑니다.
준비된 에멀젼을 일반 PCR 기계에 넣고 40회의 PCR 사이클을 수행합니다.
PCR 40주기가 완료된 후 리더기를 사용하여 읽으십시오.
판독 과정에서 물방울은 스캐너의 모세관을 순차적으로 통과합니다(세포의 형광을 판독하기 위해 유세포 분석기를 사용하는 것과 유사). 리더는 읽은 신호를 기록하고 분석합니다.
미세액적에는 두 가지 색상의 형광 신호가 기록됩니다(빨간색 - 돌연변이 유형, 녹색 - 야생형). 판독 신호의 경우 기기는 마이크로리터당 반응과 야생형의 수를 계산합니다. -형 유전자 서열이 액체에 존재하며, 돌연변이 빈도를 추정할 수 있습니다.