p1: 포도당은 부유된 대장균이 튜브 바닥에 빠르게 가라앉는 것을 방지하며, EDTA는 Ca∅, Mg⁺와 같은 2가 금속이온을 킬레이트시키는 역할을 하는 물질입니다. 2가 금속 이온은 DNase 활성을 억제하는 데 사용됩니다. RNase A를 첨가하여 RNA를 분해할 수 있습니다.
p2: 이 단계는 알칼리 처리입니다. 그 중 NaOH는 주로 세포를 용해하고 DNA를 방출하는데 사용되는데, 이는 강알칼리성일 경우 세포막이 이중막 구조에서 마이크로캡슐 구조로 변화하기 때문이다. SDS와 NaOH를 결합하는 목적은 NaOH의 강알칼리성을 높이는 동시에 SDS가 음이온 계면활성제 역할을 하여 지질 이중막을 파괴하는 것입니다.
p3: 용액 III의 기능은 단백질을 침전시키고 반응을 중화시키는 것입니다. 그 중 아세트산 칼륨은 SDS의 나트륨 이온을 칼륨 이온으로 대체하여 PDS를 형성하는 데 사용됩니다. 왜냐하면 라우릴황산나트륨은 칼륨 이온을 만나면 라우릴황산칼륨으로 변하고 PDS는 물에 불용성이며 동시에 SDS 분자가 결합하기 때문입니다. 평균 2개의 아미노산이 존재하며, 칼륨 및 나트륨 이온 대체에 의해 생성된 다량의 침전은 자연적으로 대부분의 단백질을 침전시킵니다.
2M 아세트산은 NaOH를 중화하는 데 사용됩니다. 게놈 DNA가 파손되면 조각 크기가 50-100kb이면 PDS에 의해 침전되지 않습니다. 따라서 알칼리 처리 시간이 짧아야 하며 격렬하게 흔들어서는 안 됩니다. 최종 플라스미드에는 다량의 genomic DNA가 섞여 있으며, agarose 전기영동으로 두꺼운 전체 DNA 밴드를 관찰할 수 있습니다.
75% 알코올은 주로 염을 청소하고 Dnase를 억제하는 데 사용되며, Solution III의 강한 산성도 DNA가 규산염 섬유막에 더 잘 결합하도록 만드는 데 사용됩니다.
확장 정보
플라스미드는 자율적으로 복제하는 능력이 있어 자손 세포에서 일정한 사본 수를 유지하고 가지고 있는 유전 정보를 표현할 수 있습니다. 박테리아 플라스미드는 DNA 재조합 기술에서 일반적으로 사용되는 벡터입니다. 벡터는 유전공학 수단을 통해 증식 및 발현을 위해 유용한 외래 유전자를 수용 세포에 전달하는 도구입니다.
특정 표적 유전자 단편을 플라스미드로 재조합하여 재조합 유전자 또는 재조합체를 형성합니다. 이 재조합체는 미생물학적 형질전환 기술을 통해 수용자 세포(예: 대장균)로 전달되어 재조합체의 표적 유전자가 수용자 박테리아에서 재생산되거나 발현되어 숙주 세포의 원래 특성을 변경하거나 새로운 것을 생성할 수 있습니다. 물질.
바이두 백과사전-플라스미드
바이두 백과사전-플라스미드 추출