세포핵의 분리 및 식별
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평가:
프로젝트
:
세포핵의 분리 및 식별
원리:
1
. 동일한 원심장에서도 세포 내 다양한 구조의 비중과 크기가 다릅니다.
따라서 침전 속도도 다릅니다.
차등 원심분리는 세포 내 각 소기관과 그룹을 분별하는 데 사용됩니다
.
2
세포핵을 분리하는 일반적인 방법은 조직을 균질화하여 균일한 현탁배지에서 특정 원심력으로 원심분리하는 것이다.
분리 , 분석 및 식별.
3
균질화란 조직을 저온의 균질기에 넣고 남은 균질화 배지를 첨가한 후 분쇄하는 것을 의미합니다
세포를 다양한 균질물로 분쇄합니다. 세포 소기관 및 그 내용물
단계:
1
실행: 손으로 쥐의 목을 베어 처형합니다. 꼬리를 사용하면 복부의 혈액이 흘러나올 수 있습니다. 최대한 많이
2
.재료 수집: 복부를 빠르게 열어 간을 제거하고, 생리식염수를 채운 작은 비커에 반복해서 세척합니다.
1g
간 조직을 비커에 넣고
3
, 균질화: 추가
8ml
사전 냉각
0.25mol/L
자당
-0.003mol/L
염화칼슘
비이커에 염화칼슘 용액을 넣고 간 조직을 조각으로 자르고, 잘게 썬 간 조직을 유리 균질기에 부어
균질기 하단이 잠기도록
담근다
예를 들어, 얼음 조각이 담긴 용기에 균질화기 막대를 수직으로 튜브에 삽입하고
눈에 띄는 조직 조각이 보이지 않을 때까지 균질화합니다.
4
. 여과:
8
층의 거즈를 사용하여 균질액을 원심분리 튜브로 여과합니다.
5
, 원심분리: 저울에 있는 각 원심분리 튜브 쌍의 균형을 맞추고,
2500r/min
원심분리
15분,
취합니다. 상등액 액체를 다른 원심분리 튜브에 넣고 상등액을 약
1ml
남겨둡니다.
6
. 도말: 상청액을 취하고 도말을 준비합니다(
1
로 표시됨)
.
원래 원심분리 튜브에 남아 있는 상등액을 피펫으로 옮겨 침전시켜 현탁액에 침전시켰습니다.
(표시됨
2)
)
자연 건조하세요.
7
, 염색: 각각 도말
1
,
2
톨루이딘 블루 염료 용액을 한 방울씩 첨가하고 5분간 염색합니다
8
세척: 염료 용액을 헹구고 건조시킵니다.
9
. 현미경 검사: 현미경으로 관찰하고 분석합니다.
참고:
1
, 시약 오염을 방지하기 위해 작업 표준화
2
, 세포 현탁액 만들기 액체를 부드럽게
3
원심분리기를 사용할 때는 낮은 속도에서 높은 속도까지 주의를 기울이세요.
결과 예측:
검체는 저배율 현미경으로 발견했다가 고배율 현미경으로 바꿨다.
간세포의 핵이 떨어져 나간 것을 볼 수 있다
청자색으로 염색되어 있고, 중앙에 2개의 핵소체가 있습니다.