1. 공기중 미생물 검출방법------총균수
(영양한천, 121°C에서 20분간 고압멸균, 배양시간은 37) °C, 48h)
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1. 두 가지 방법
(1) 충격 방법(레벨 2 또는 레벨 6 미생물 샘플러)
( 2) 자연침강법(5분간 노출)
채취 : 매화점, 높이 : 1.2~1.5m, 벽으로부터의 거리 : 1m.
2. 차세트의 미생물 시험방법
(1) 총균수
1. 생리식염수 제조방법 : 염화나트륨(8.5g)을 녹인다. ) 증류수(1000mL)에 튜브당 10mL씩 시험관에 분주하고 121°C에서 20분간 오토클레이브합니다.
2. 샘플링 : 면봉에 생리식염수를 적신 후 티 세트의 내측과 외측 가장자리, 즉 입술이 닿는 원(1~1.5cm)에 50cm2 정도 도포한 후 사용 면봉이 손에 닿는 부분을 잘라내기 위해 멸균가위를 사용하고, 생리식염수 10mL에 면봉을 넣어 4시간 이내에 검사를 위해 보내드립니다.
3. 검사 절차 :
검체 검사 → 멸균된 플레이트 2개에 각각 1 mL씩 첨가 (오염이 심한 경우 10배 단위로 희석 가능) → 37°C , 48h 배양 → 콜로니 계수 → 보고서
4. 단위: cfu/cm2.
(2) 대장균군
1. 배양배지 : 유당 및 담즙염 발효배지(이중재료, 튜브당 10mL, 115°C에서 15분간 고압멸균)
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2. 검출방법 : 발효방법(특정 내용은 교과서 11쪽)
3. 시료검사(남은 시료로 총균수를 판별함)
4. 그람염색 과정 : (양성균은 보라색으로, 음성균은 붉은색으로 나타남)
(1) 초기염색 : 1분 후 물로 세척
(2) 요오드; 염색: 1분, 물로 세척;
(3) 탈색: 30초, 물로 세척
(4) 대조염색: 1분, 물로 세척하고 건조될 때까지 기다린다. 현미경으로 검사하다.
5. 결과보고 : 유당발효관에서 최종적으로 산과 가스가 발생하고, 그람염색에서 비바실러스균이 음성이면 대장균군 검출을 보고할 수 있습니다.
3. 수건 및 침구류의 미생물 검출 방법
(1) 총 박테리아 수
1. 샘플링
(1 ) 수건, 베개 커버: 반으로 접은 후 각 변 중앙에 25cm2
(2) 침대 시트 및 이불: 위쪽 및 아래쪽 중앙에 25cm2 를 앞뒤로 적용합니다. p>
2. 테스트 방법은 차세트의 총세균수와 동일합니다.
3. 계산단위 : cfu/25cm2.
(2) 대장균군 (검사방법은 차세트 대장균군 검사와 동일)
1. 도말법 : (총균수 측정시 채취한 검체를 사용한다)
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4. 미용도구의 미생물 시험방법
(1) 대장균군
1. 시료채취
클리퍼스 : 상하부 균일하게 분포 이발기 앞쪽에 각각 3회 도포;
미용실, 가위, 페디큐어 도구: 샘플을 채취하는 데 사용되는 칼과 가위의 양쪽에 1회 도포합니다.
2. 검체 5mL를 이중재료 유당 및 담즙염 발효관에 붓고, 37°C에서 24시간 동안 배양한다.
3. 분리 배양: 에오신 메틸렌블루 플레이트에 접종하고 그람염색현미경을 한다
4. 확인시험 : 유당발효관을 37°C에 접종하고 24시간 배양한 후 가스발생을 관찰한다.
5. 결과 보고서: 결국 유당관에서 산과 가스를 생성하고 그람염색 음성인 무균균은 대장균군 양성으로 보고될 수 있습니다.
(2) 황색포도상구균
1. 배양배지 : 7.5% 염화나트륨배지 또는 트립톤대두배지
2. 단계 :
(1) 남은 대장균군 5mL를 배양배지에 붓고, 37°C에서 24시간 동안 배양합니다.
(2) 혈액판에 접종하고, 37°C에서 배양합니다. 24시간 동안 모양을 관찰합니다: 둥글고 황금색이며 볼록하고 표면이 매끄러우며 주위에 용혈 원형이 있습니다.
(3) 현미경 검사를 위한 집락 선택: 그람 양성(빨간색), 포도 모양 배열; ;
(4) 만니톨 발효시험 : 만니톨 발효배지에 접종하여 37℃에서 24시간 배양하여 산이 생성되는지 관찰한다.
(5) 혈장응고효소 시험
슬라이드 방법: 깨끗한 유리 슬라이드의 양쪽 끝에 한쪽 끝에 생리식염수 한 방울을 떨어뜨리고 다른 쪽 끝에 혈장 한 방울을 떨어뜨려 각각의 고리형 콜로니를 접종하고 혼합합니다. 5분 후에도 응고 현상이 없으면 음성, 혈장에는 과립상 혈전이 있으나 생리식염수에는 없으면 양성이다.
5. 슬리퍼의 미생물 검사 방법
곰팡이 및 효모
(생리식염수에 유리구슬을 첨가해야 함)
1 배양베이스 : 곰팡이배지, (타이거레드) 벵갈레드배지, 감자포도당한천배지(PDA)
2. 채취 : 각 슬리퍼 윗면 접촉부 5cm 지점에 면봉을 사용한다. p>4. 배양 : 25~28°C의 곰팡이 배양기에서 1주일 동안 배양하고 관찰한다.
5. 단위는 cfu/50cm2 입니다.
6. 욕조 및 세면기의 미생물 검사
(1) 총 박테리아 수
멸균 식염수: 욕조 샘플링용 125mL/병 ; 얼굴(발) 세면기 샘플링용 50mL. 샘플링 장소: 대야 내부 높이의 1/2~1/3;
배포 지점: 욕조의 매화 반점; 얼굴(발) 대야 반대편의 반점;
방법: 스미어링 방법(다기 세트 방법과 동일)
단위: cfu/25cm2.
(2) 대장균군(차 세트와 동일)
7. 수영장 수질 미생물 검사
(1) 총 박테리아 수
1. 검체병 : 무산, 무알칼리, 무독성 유리용기.
2. 멸균 전, 충분한 양의 10% 티오황산나트륨 용액(일반적으로 물 샘플 125mL에 대해 0.1mL)을 추가합니다.
3. 샘플링
4. 작업 단계(티 세트의 총 박테리아 수와 동일)
(2) 대장균군
1. 배양배지 : 3배 농축된 락토펩톤 배양배지(증류수의 양은 변하지 않고, 기타성분은 3배가 됨)
2. 단계
(1) 추측시험
삼중농축 락토펩톤 배양액 50mL가 들어 있는 2개의 큰 시험관(작은 시험관 포함) 각각에 물 시료 100mL를 첨가하고, 삼중 농축 락토펩톤 배양액 5mL가 들어 있는 시험관 10개를 첨가합니다( 작은 시험관이 들어 있는 시험관)에 물 시료 10mL를 첨가합니다. 잘 흔들어 배양합니다.
(2) 플레이트 분리
에오신 메틸렌 블루를 접종하고 배양한 후 전형적인 집락 형태를 관찰합니다: 검은색 보라색 또는 빨간색 보라색, 금속 광택.
(3) 다중발효시험
그람염색을 실시하고 유당발효관에 접종하여 배양 후 관찰한다.
(4) 표를 찾아보세요: 물 샘플 1000mL에 들어 있는 대장균군 MPN 값.
8. 먹는물에 대한 미생물 검사 방법
(1) 검체 채취
1. 검체 용기는 깨끗하고 무색이며 독성이 없는 폴리에틸렌 플라스틱으로 만들어져야 한다. 및 경질 유리(붕규산 유리라고도 함). 검체병은 전용병이어야 하며, 실험실에서 과농축된 용액이 담긴 병을 검체병으로 사용해서는 안 됩니다. 일반적으로 우리는 샘플링을 위해 입이 좁은 500ml의 오토클레이브 병을 사용합니다.
2. 용기, 마개, 마개는 멸균온도에 견딜 수 있어야 합니다.
3. 검사에 사용되는 모든 물품은 완전히 소독되어야 합니다.
멸균 전에는 깨끗이 씻어서 고압 증기로 121°C에서 20분간 멸균하거나, 160°C에서 2시간 동안 건조 구워야 합니다.
4. 냉장보관 후 4시간 이내에 테스트해 보세요. 유리 잔류 염소가 있는 경우 소독 전에 샘플링 병 125ml마다 티오황산나트륨 용액 0.1ml를 추가해야 합니다.
(2) 총 박테리아 수 (조작 단계는 차 세트와 동일하며 공백 관리를 수행하는 것을 잊지 마십시오)
(3) 총 대장균군
1. 유당발효시험
(1) 10mL 이중물질 유당 발효관에 10mL의 물 시료를 첨가하고, 10mL 단일물질 유당 발효관에 1mL의 물 시료를 첨가한다. 샘플을 10mL 단일 물질 유당 발효 튜브에 첨가하고, 각각 희석하여 5개 튜브에 접종합니다.
(2) 37℃에서 24시간 배양하여 산과 가스발생 현상 관찰
2. 분리배양(에오신메틸렌블루를 접종하여 배양)
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3 .확인 실험(그람 염색, 현미경, 유당 발효관 접종)
4. 결과 적용: 표를 찾아보세요.
(4) 내열성대장균군
1. 배양배지 : EC배지
2. 조작단계 : 대장균군 다관발효법과 동일하다.
3. 배양 온도: 44.5°C, 24시간.
(5) 대장균
1. 배지 : EC-MUG 배지(배지를 가열하여 녹인 후 366nm 자색광 하에서 형광 확인)
2. 배양온도: 44.5℃, 24시간.
3. 관찰: 어두운 곳에서 366nm UV 램프를 사용하여 파란색 형광이 생성되는지 확인합니다.
4. 양극 튜브의 수를 계산하고 표를 찾아봅니다. 결과는 MPN/100mL로 보고됩니다.
9. 공공 장소의 중앙 집중식 공조 시스템
(1) 응축수 및 냉각수 내 레지오넬라 뉴모필라
(1) 샘플링
1. 검체용기 : 유리병, 폴리에틸렌병, 입이 넓은 병을 선택하실 수 있으며, 멸균하여 사용하실 수 있습니다.
2. 샘플링량 : 각 샘플링 지점마다 무균작업에 따라 약 500ml의 물 샘플(또는 침전물, 연질 진흙 등의 샘플)을 채취합니다.
3. 중화: 염소나 오존으로 멸균한 검체의 경우 티오황산나트륨 용액을 첨가하여 검체 용기를 중화시킨 후 멸균하세요.
4. 검체 운송 및 보관: 검체는 2일 이내에 실험실로 전달하는 것이 가장 좋지만, 반드시 냉동할 필요는 없지만 빛과 열로부터 보호되어야 합니다. 실온에서 15일 이상 보관 가능합니다.
(2) 열처리 : 용출된 시료 1ml를 취하여 50°C 수조에서 30분간 가열한다.
산처리 : 용출된 검체 5ml를 취해 pH 2.2로 조정한 후 가볍게 흔들어 5분간 방치한다.
(3) 접종된 플레이트를 35~37°C, 2.5% 농도의 CO2 인큐베이터에 넣습니다. 배양체가 관찰되면 플레이트를 뒤집어 보습에 주의하면서 10일간 배양합니다. .
(4) 관찰
레지오넬라는 성장이 느리고 다른 세균에 쉽게 덮이기 때문에 매일 입체경으로 관찰해야 한다. 레지오넬라균 군집은 일반적으로 흰색, 회색, 파란색 또는 보라색 등 다양한 색상을 갖지만 암갈색, 회색 녹색 또는 진한 빨간색으로 나타날 수도 있습니다. 군집은 표면이 깔끔하고 매끄러우며 전형적인 갈은 유리 모양이며 일부는 형광성을 띕니다. 자외선 아래서.
(2) 공기 공급 장치의 총 박테리아 수
무균 작동을 사용하고 6단계 메쉬 공기 충격 샘플러를 사용하며 28.3L/min의 공기 흐름을 사용합니다. 샘플링 지점 5~15분 동안 수집합니다. 균이 채취된 영양한천배지(nutrient agar plate)를 놓고 35~37℃에서 48시간 동안 배양한 후 집락수를 센다.
(3) 공기 공급 중 총 곰팡이 수
샘플링 방법은 위와 동일합니다. 곰팡이를 채취한 후 사부로 한천 플레이트에 놓고 28°C에서 배양합니다. 5~7일간 매일 관찰하고, 첫날에 수집하여 결과를 기록한다. 곰팡이의 수가 너무 많으면 5일째에 결과를 세어 배양시간을 기록하여 cfu/m3로 환산한다.
(4) 공기공급 중의 베타용혈성 연쇄상구균
혈액한천배지 위에 회백색의 볼록한 표면, 직경 0.5mm~0.7mm의 작은 집락을 형성하고, 집락은 투명 또는 반투명하고 표면은 매끄럽고 유백색이며 집락 주위에 용혈 고리가 있습니다. 현미경 검사에서는 그람 양성 비세균이 원형 또는 타원형으로 사슬 모양으로 배열되어 있습니다.
(5) 공기 덕트 내부 표면의 미생물 검사
샘플링 영역: 각 지점의 샘플링 영역은 50cm2 이어야 합니다.
시료채취방법 : 긁어내는 방법, 닦아내는 방법
세균, 곰팡이 배양 및 계수방법은 위와 동일