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HPLC는 무엇을 하나요? 원칙? 어떻게 하나요?

HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography)로, 정식 영어 명칭은 High Performance Liquid Chromatography입니다. 이 방법은 화학, 의학, 산업, 농학, 상품검사, 법률검사 등의 분야에서 중요한 분리분석 기술로 활용되고 있습니다.

용도: 고성능 액체 크로마토그래피는 끓는점이 높고 열 안정성이 낮으며 생리 활성이 높으며 상대 분자량이 상대적으로 큰 물질의 분리 및 분석에 더 적합합니다. 따라서 핵산에 널리 사용됩니다. , 펩타이드, 락톤 및 점성 물질, 고리 방향족 탄화수소, 폴리머, 약물, 인간 대사 산물, 계면활성제, 항산화제, 살충제, 제초제 및 기타 물질을 분석합니다.

원리: 고성능 액체 크로마토그래피는 액체를 이동상으로 사용하고 고압 주입 시스템을 사용하여 극성이 다른 단일 용매 또는 혼합 용매, 완충제 및 기타 이동상을 서로 다른 비율로 고정식으로 펌핑합니다. 컬럼의 구성 요소가 분리된 후 검출을 위해 검출기로 들어가 시료의 분석 및 분리가 이루어집니다.

작동 방법: 아래 그림과 같이 용매 저장소에 있는 이동상을 펌프로 흡입하고 기울기 조절기에 의해 일정한 기울기에 따라 혼합한 후 압력과 출력을 측정합니다. 유량은 주입 밸브(장치)로 유입되어 가드 컬럼과 분리 컬럼을 통과한 후 검출기를 통해 검출기에 도달합니다. 데이터는 데이터 처리 장비에 의해 처리되거나 크로마토그램이 기록기에 의해 기록됩니다. 분획 수집기에 의해 수집되고 폐액은 폐액 병에 의해 수집됩니다.

확장 정보:

액체 크로마토그래피의 초기 단계에서는 대구경 유리 컬럼을 사용하여 상온과 상압에서 액위 차이가 있는 이동상을 이송하며, 고전적인 액상 크로마토그래피라고 불리는 이 방법은 컬럼 효율성이 낮고 시간이 오래 걸립니다(종종 몇 시간). 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)는 고전적인 액체 크로마토그래피를 기반으로 하며 1960년대 후반에 가스 크로마토그래피 이론이 도입된 이후 빠르게 발전했습니다. ?

HPLC는 고정상과 이동상의 성분에 따라 순상 크로마토그래피와 역상 크로마토그래피로 구분됩니다.

순상 크로마토그래피

극성 고정상(예: 폴리에틸렌 글리콜, 아미노 및 니트릴 결합상)을 사용하며 이동상은 상대적으로 비극성인 소수성 용매(예: 알칸)입니다. n-헥산, 사이클로헥산), 에탄올, 이소프로필알코올, 테트라히드로푸란, 클로로포름 등을 첨가하여 성분의 체류시간을 조절하는 경우가 많습니다. 이는 중간 극성 및 높은 극성 화합물(예: 페놀, 아민, 카르보닐 및 아미노산 등)을 분리하는 데 종종 사용됩니다.

역상 크로마토그래피

일반적으로 비극성 고정상(예: C18, C8)이 사용됩니다. 이동상은 물 또는 완충액이며 종종 메탄올, 아세토니트릴, 이소프로필을 첨가합니다. 알코올, 아세톤, 테트라히드로푸란 및 기타 수혼화성 유기 용매를 사용하여 머무름 시간을 조정할 수 있습니다. 비극성 화합물과 극성이 낮은 화합물의 분리에 적합합니다. RPC는 현대 액체 크로마토그래피에서 가장 널리 사용되며, 통계에 따르면 전체 HPLC 응용 분야의 약 80%를 차지합니다.

참고: 바이두 백과사전-고성능 액체 크로마토그래피

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