DS는 중성염법, 산법, 알칼리법, 효소가수분해법 등으로 추출할 수 있습니다. 현재는 알칼리 추출과 효소 추출을 병행하는 방법이 주로 사용되고 있다.
Gao Hua 등은 알칼리-효소 가수분해 추출법에서 알칼리 농도를 높이고 1 mol/L 수산화나트륨 용액을 사용하여 2시간 동안 추출함으로써 시간을 단축하고 불순물의 침전을 방지했습니다. DS의 수율은 순도가 각각 32.6%, 95.2%에 달했다.
Xu Chuan et al.은 DS를 추출하기 전 연갑거북 연골을 가수분해하기 위해 2% 아세트산 나트륨을 사용했으며, 제품의 질소 함량은 0.67% 감소한 반면, 헥소사민 질량 분율은 1.87 증가했습니다. %. 특정 산업 생산 가치.
Li Ruiguo는 진한 알칼리-효소 가수분해(I), 묽은 알칼리-효소 가수분해(II), 묽은 알칼리 및 묽은 염-효소 가수분해(III), 묽은 알칼리 및 농축 소금의 4가지 추출 공정을 수행했습니다. (IV) 비교 결과 공정 I의 추출 시간이 짧고 제품의 색상이 어두우며 분자량이 작은 것으로 나타났습니다. 공정 II, III 및 IV가 작업하기 쉽고 제품 색상이 양호합니다. 분자량이 더 크고, 특히 공정 IV로 만든 제품의 품질이 더 좋습니다.
Hua Ziyi는 알칼리 복합 효소와 트립신의 이중 효소 가수 분해 방법을 사용하여 CS를 추출합니다. 수율은 기존 방법보다 1% -2% 높고 생산 주기는 1/3로 단축됩니다. 생산 비용이 5% 감소합니다.
Nakano 등은 먼저 소의 비강 연골을 pH 4.5 및 37°C에서 0.1mol/L 아세트산 나트륨으로 전처리하여 연골 조직이 내인성 효소의 작용에 따라 자동으로 분해될 수 있도록 했습니다. 외인성 효소를 사용하여 생산 비용이 절감되고, DEAE 이온 교환 크로마토그래피 정제를 통해 89% DS를 함유한 GAGs 혼합물을 얻을 수 있습니다. 다양한 GAG의 다양한 용해도와 전하 밀도를 사용하여 CS를 분류하고 정제할 수 있습니다. 일반적으로 사용되는 분리 방법으로는 에탄올 침전법, 염용액 침전법, 4차 염 착화합물화법, 이온교환 크로마토그래피법 등이 있으며, 그 중 에탄올 침전법이 가장 일반적으로 사용됩니다.
가오화(Gao Hua) 등은 효소적 가수분해물을 저온, 감압 하에서 1차 농축한 후 에탄올로 침전시키는 공정을 이용했는데, 이는 에탄올의 양을 줄이고 제품 수율을 높일 수 있다.
Zhang Zheng 등은 DS를 분리 정제할 때 먼저 Sephadex G-10 겔 여과를 사용한 후 이온 교환 크로마토그래피에 D061 거대 다공성 이온 교환 수지를 사용하여 순도를 99.7%까지 높일 수 있었습니다. 최근에는 CS의 분리 및 정제에도 멤브레인 기술이 사용되었습니다.
Lignot 등은 비교 연구를 통해 DS를 농축, 정제하는 한외여과 기술의 타당성을 확인했으며, 기공 크기가 0.1um인 한외여과막이 가장 분리 효과가 있음을 입증했습니다. DS에 대한 분석 방법은 다양하며 일반적으로 고성능 액체 크로마토그래피, 분광 광도법, 전기 영동, 구조 분석 방법이 있습니다.
1. 고성능 액체 크로마토그래피
글리코사미노글리칸 화합물 중 일부는 황산에스테르 그룹을 포함하고 일부는 황산에스테르 그룹을 포함하지 않으며, 황산에스테르 그룹을 포함하는 화합물은 많은 황산에스테르 그룹을 포함합니다. 각 이성질체에는 DS 지질 염기에 다수의 다른 성분이 포함되어 있으므로 측정 전에 분리해야 하는 경우가 많습니다.
DS 이당류 단위 구조는 매우 강한 설폰산 에스테르 그룹과 카르복실산 그룹을 포함하며 물에 용해되고 분자량이 큽니다. 고성능 액체 크로마토그래피는 주로 다양한 성분을 분리하고 검출하는 데 사용됩니다.
고성능 액체 크로마토그래피를 통한 가수분해 및 분리 후 글리코사미노글리칸의 자외선 검출은 20년 이상의 역사를 가지고 있으며, 이 분야에 대한 연구도 최근 몇 년간 큰 진전을 이루었습니다. 구체적인 분석 방법은 다음과 같습니다:
(1) 프로테아제-엔도-β-자일로시다아제 가수분해 형광 식별 방법,
(2) 화학 발광 방법,
(3 ) 직접분리결정법;
(4) 질산화이온크로마토그래피 등
2. 분광광도법
DS는 물에 용해되어 180-200nm의 자외선 영역에서 흡수 피크를 갖는 점성의 무색 투명한 액체가 됩니다. 이 파장 범위에는 흡수를 방해하는 물질이 너무 많습니다. 기존 물질을 분리하지 않으면 실제 측정 의미가 없습니다.
CS의 함량은 이당류 구조단위의 반응성 황산에스테르기와 아세틸아미노기의 발색반응과 다양한 발색시약을 활용하여 가시광선 영역에서 측정할 수 있습니다. 두 가지 상황으로 나눌 수 있다.
(1) DS는 발색체와 반응하여 가수분해 없이 발색한다.
( 2) 가수분해 후 발색제와 반응하여 발색하는 방법에는 아세틸아세톤-p-디메틸아미노벤즈알데히드법, 플로로글루시놀법, 메틸렌블루법 등이 있습니다.
3. 전기영동법
전기영동법은 시료 준비가 간단하고 투여량이 적으며 분석 시간이 짧아 DS의 정량 분석에 적용할 수 있습니다.
이 방법은 기존 방법에 비해 복잡한 시료 전처리 과정이 필요하지 않으며 분석 시간도 대폭 단축된다.
4. 구조 분석 방법
현재 DS 구조 분석에 사용되는 방법에는 주로 IR, UV, HPLC, CE, MS, NMR 등이 있습니다.