준비작업은 집균기의 필터를 제거하고 (그림 1 참조), 필터의 작은 구멍 수를 집계하여 균액 농도를 계산할 준비를 한다. 또한, 여과과정에서 외원 세균이 유입되는 것을 막기 위해 집균기의 집균기를 고압 멸균해야 한다.
세균은 일정한 농도의 곰팡이균액 300 ~ 500ML 을 모아 집균기에 장착하고, 집균기는 연동 압력을 이용하여 균액에 일정한 압력을 가하여 균류가 구멍 지름이 0.45 um 인 폴리탄산지방막을 통과하게 한다. 여과법은 세균을 상대적으로 고르게 필터막에 분산시킬 수 있기 때문이며, 폴리탄산지방막을 선택하는 것은 이 막이 투과성이 뛰어나 현미경으로 관찰하기 쉽기 때문이다.
염색집균을 한 후 필터를 제거한 후 일부분을 잘라서 슬라이드를 올려 염색하고 고정시킵니다. 염색의 목적은 세균과 배경의 대비를 증가시켜 관찰하기 쉽도록 하는 것이다.
현미경 카운트와 계산균액이 집균기를 통해 여과된 후, 필터막에서의 세균 분포는 그림 2, 그림 3 에 나와 있으며, 세균 분포는 다음과 같은 두 가지 특징을 가지고 있음을 알 수 있다. 하나는 세균이 하나의 원형 영역에 집중되어 있고, 이 원형 영역은 베젤의 작은 구멍에 해당한다. 둘째, 각 원형 영역 사이에는 세균이 거의 없다. 막상 세균 분포의 이런 특징에 따라 원형 영역 단위로 계수해 원형 영역 내 세균의 평균 수를 세어 균액 중 세균의 총 수를 계산해 낼 것을 제안한다. 구체적인 단계는 다음과 같습니다. 무작위로 10 개의 원형 영역을 선택하고, 오일 거울 아래에서 초점 거리를 조정하여 더 선명한 이미지를 얻고, 각 원형 영역 내의 세균 수를 집계한 다음 공식에 따라 균액의 농도를 계산합니다.
영향 요인
계산 공식의 개선은 집균기로 샘플 균액을 필터링할 때 필터 배플의 작용으로 인해 세균이 전체 필터에 고르게 분산되지 않고 필터의 작은 구멍에 집중적으로 분산되므로 총 세균 수를 계산할 때 공식 x 를 사용할 수 없습니다 이 실험에서 세균 분포의 특징에 따라 원형 영역 단위로 세균 총수를 계산하는 아이디어를 제시하여 계산 결과를 실제 값에 더 가깝게 만들어 검출 정확도를 높였다.
세균 크기의 영향 세균 크기가 본 실험에 미치는 영향은 주로 거울 검사에서 세균이 너무 작아서 현미경 카운트할 때 세균을 배경에서 구분할 수 없는 경우, 우리의 실험 결과 대장균과 포도상구균을 구분할 수 없고, 큰 곰팡이는 명확하게 구분할 수 있는 것으로 나타났다.
< P > 검사 시간을 더 단축하는 고전적인 검사 방법은 플레이트 배양법으로 결과 정확도가 높지만 시간이 오래 걸리며 검사 시간을 단축하기 위해 마이크로균군락법이 등장해 검사 시간을 4 시간 정도로 줄였다. 본 연구는 세균을 배양하지 않고 막에서 염색한 후 현미경으로 직접 계산해 검사 시간을 최소화해 전체 검사 시간을 약 1 h 로 했다.