내삼 항체 종류가 많은데, 예를 들면 β-actin, 베타-Tubunlin, GAPDH, Lamin B 등이 있습니다. 그렇다면 자신의 실험에 대해 어떻게 선택해야 할까요? 다음은 내삼 항체 선택에 따라야 할 원칙을 간략하게 소개한다.
1. 샘플 출처:
가장 먼저 고려해야 할 것은 실험 샘플이 어떤 종에서 나온 것인가이다.
1, 포유류의 조직 또는 세포 샘플, 보통 베타-Actin, 베타-Tubulin, GAPDH, Lamin B, Histone H3, Na, K ATPase 등을 선택합니다.
2, 식물 소스 실험 샘플, plantactin, Rubisco 등을 선택할 수 있습니다.
3, 기타 출처 샘플 연구가 적기 때문에 문헌 보도를 참고하여 적절한 단백질을 내삼으로 선택해야 한다.
2. 의도 단백질 분자량:
내부 참조 항체 선택 시 의도 단백질 분자량의 크기를 고려해야 합니다. 일반적으로 목적단백질과 내삼단백질 분자량의 차이가 5KD 이상이라는 것을 보장해야 한다. 예를 들어 목적단백질 분자량이 45KD 인 경우, 이때 내삼으로 베타-actin 을 선택하는 것은 적합하지 않으며, GAPDH 나 베타-Tubulin 을 내삼으로 선택하는 것을 고려해 볼 수 있다.
3. 목적단백질 표현 부위:
일반 단백질 검사의 경우 β-actin, β-Tubulin 항체 등이 될 수 있으며, 핵단백질의 정량, 특히 샘플단백질은 핵이다 일반적으로 사용되는 핵 내삼 항체 (Lamin A, Lamin B, Histone H3) 외에도 다른 일반적인 핵단백질 내삼에는 PCNA, K70, K80 등이 있다. 일부 문헌 보도에서 Erk2, Tata Binding Protein ( 막 단백질 검사의 경우 일반적으로 사용되는 내삼 항체 Na, K ATPase 입니다. 미토콘드리아 단백질 검출의 경우 VDAC1 과 COX IV 를 내삼 항체 () 로 자주 사용한다.
위의 몇 가지 원칙은 일반적인 상황만을 위한 것이지만, 내삼의 선택은 실제 실험 환경을 고려해야 한다는 점에 유의해야 한다. 예를 들어 일부 세포에서는 조직 저산소증, 당뇨병 등으로 인해 GAPDH 의 표현이 높아져 내삼이 되기에 적합하지 않다. 예를 들어, 세포 증식과 관련된 실험에서 c-Jun 은 자신의 표현 변화로 인해 내삼에 적합하지 않습니다. 시들어 떨어지는 실험에서 TBP, 라민 등도 내삼으로 적합하지 않다. 따라서 실험 방안을 설계할 때는 이러한 요소들을 고려하고 해당 문헌을 조회해야 하며, 실험 과정에서도 내삼표현에 이상이 생기면 이 방면의 요소를 고려해야 한다.